بیان ترشحی ژن بتا-گزایلوزیداز باکتریایی حاوی برچسب‌ هیستیدین در پیکیا پاستوریس

  سابقه و هدف: بتا-گزایلوزیدازها (EC 3.2.1.37)، از مهم‌ترین آنزیم‌ها در مجموعه آنزیم‌های همی‌سلولازی با پتانسیل کاربرد بالا در صنعت از جمله تولید بیواتانول، از خانواده گلیکوزیدازها بوده که حذف متوالی بقایای بتا-گزایلوزیل را از انتهای غیر احیا‌کننده‌ی گزایلوبیوز و گزایلوالیگوساکاریدهای خطی با پیوندهای β-1,4 انجام داده و به همراه بتا-گزایلانازها، برای دپلیمریزه کردن کامل گزایلان ضروری می‌باشند. هدف از این تحقیق بیان ترشحی ژن بتا-گزایلوزیداز باکتریایی حاوی برچسب‌ هیستیدین در میزبان بیانی پیکیاپاستوریس، جهت رسیدن به افزایش سطح بیان و سپس خالص‌سازی نسبی آنزیم بود. مواد و روش‌ها: در این تحقیق توالی پروتئینی آنزیم بتا-گزایلوزیداز باکتریایی پس از بهینه‌سازی کدون برای میزبان بیانی Pichia pastoris، و افزودن توالی 6xHis-tag با طراحی پرایمرهای مناسب، به میزبان مخمری انتقال یافت. یافته‌ها: نتایج به دست آمده در کشت فلاسک، تولید U/L 40 آنزیم بتا-گزایلوزیداز نوترکیب با فعالیت ویژه‌ی U/mg  6/0 را در محیط بیانی BMMY نشان داد.  نتیجه‌گیری: کلونینگ و بیان موفق ژن بتا-گزایلوزیداز باکتریایی جهت به‌دست آوردن آنزیم فعال و پایدار از سیستم بیانی مخمر، با مقدار بالای بیان آنزیم انجام شد